Informace o publikaci
Methods of directed evolution of PA-IIL lectin
| Název česky | Metody řízené evoluce lektinu PA-IIL |
|---|---|
| Autoři | |
| Rok publikování | 2010 |
| Druh | Konferenční abstrakty |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Popis | Řízená evoluce je účinný nástroj široce používaný v proteinovém inženýrství k produkci proteinů s pozměněnými anebo vylepšenými vlastnostmi. Tento přístup zahrnuje mnoho metod, které se používají k produkci knihoven mutantů a ke screeningu těchto knihoven. V naší práci jsou používány dvě mutační techniky. První je náhodná mutageneze pomocí error-prone PCR (která zavádí nukleotidové záměny během PCR pomocí DNA polymerasy náchylné k chybám a mutačních reakčních podmínek). Druhá technika je cíleně-náhodná mutageneze (která využívá směsi speciálních primerů nesoucích náhodné záměny bazí na vybraném místě). Gen lecB, který kóduje lektin PA-IIL původem z Pseudomonas aeruginosa byl vybrán jako cílový gen, který bude modifikován náhodnou mutagenezí. Tento rozpustný protein je dobře charakterizován a vykazuje neobvykle vysokou afinitu pro monosacharidy, které se často vyskytují jako terminální residua glykokonjugátů buněčného povrchu v mucinu pacientů s cystickou fibrosou. Mutageneze by nám měla pomoci vytvořit protein s vylepšenou afinitou a specifitou. V současné době jsou optimalizovány metody pro high-throughput screening knihoven mutantů a testování vazebných vlastností mutantů pomocí resonance povrchového plasmonu, aby byli nalezeni mutanti s pozměněnou afinitou a specifitou. Mutované lektiny s vylepšenými vlastnostmi by mohly být v budoucnu využity v biotechnologiích a pro bioanalytické účely. |
| Související projekty: |