Cílem projektu je vytvořit metodický příklad testů cytotoxicity a apoptózy pro studenty 1. ročníku LF MU předmětu Lékařské biologie pro magisterský studijní program Všeobecné a Zubní lékařství a propojit tím odbornou problematiku řešenou v rámci doktorského studijního programu s výukovým zaměřením Biologického ústavu LF MU. Řešitelka v rámci své disertace studuje biologickou aktivitu vybraných benzo(c)phenanthridinových alkaloidů. Zaměřuje se na testy cytotoxicity (MTT assay, stanovení hodnot IC50) a detekci apoptózy. Na základě dat, která získá při studiu alkaloidů bude vypracován protokol, jež bude vodítkem pro práci studentů v praktickém cvičení "Hodnocení cytotoxicity", které probíhá v podzimním semestru. Dále bude vypracována presentace, která studentpm přiblíží problematiku testování cytotoxicity a detekce apoptózy. Předkládaný projekt rozšíří stávající téma spraktických cvičení a umožní seznámení studentů s širšími možnostmi využití MTT testu antiproliferační aktivity na konkrétním příkladu testování přírodních látek s potenciálně cytostatickým efektem a následné statistické zpracování výsledků. Praktické cvičení bude rozšířeno o pojem apoptóza a hodnocení výsledků studia apoptózy na průtokovém cytometru pomocí APOTESTU, kombinujícího značení Anexinem V-FITC a propidium jodidem. Demonstrace metodiky MTT testu a měření na průtokovém cytometru, stejně jako práce na vyhodnocení výsledků bude prvním seznámením studentů 1. ročníku s těmito metodami, které mají velký význam v diagnostice a prognostice nádorových i jiných chorob.

Výsledky

Studium cytotoxicity MTT testem je tématem praktického cvičení č. 8 "Hodnocení cytotoxicity" v podzimním semestru výuky Lékařské biologie pro studenty 1. ročníku LF MU magisterského programu Všeobecné lékařství a Zubní lékařství. Dosavadní protokol těchto praktických cvičení demonstruje pouze jednoduchý pokus s odumřením buněk v různých koncentracíh etanolu. Předkládaný projekt rozšíří tématžřiku tohoto praktického cvičení a to přípravou nového protokolu, na základě kterého budou studenti postupovat a presentace, která bude základem pro výklad problematiky testování cytotoxicity. V praktickém cvičení: 1. Budou studenti na základě jmenovaných studijních materiálů seznámeni s širšími a praktickými možnostmi využití MTT testu na konkrétním příkladu testování přírodních látek s potenciálně cytostatickým efektem, včetně seznámení se zásadami měření na mikrodestičkovém ELISA readeru. Na základě předložených dat zpracují statisticky výsledky programu Microsoft Excel, stanoví IC50, což je hodnota, při které odumírá 50 % bb vzhledem ke kontrole, hodnota, která je základním kritériem toxicity látky. 2. Praktické cvičení bude navíc rozšířeno o pojem apoptóza a o hodnocení výsledků studia apoptózy pomocí APOTESTU (kombinace Anexinu V-FITC a propidium jodidu). Studenti budou seznámeni s pojmem apoptóza, s morfologickými znaky apoptotické buňky (fluorescenční a elektronová mikroskopie) a především s průtokovou cytometrií, která je velmi významnou diagnostickou metodou. Studenti budou hodnotit dot plot grafy, které budou výstupem měření buněk po aplikaci APOSTU. Demonstrace provedení a MTT testu a měření na průtokovém cytometru, stejně jako práce na vyhodnocení výsledků bude prvním seznámením studentů 1. ročníku s těmito metodami a přispěje k jejich pochopení. 3. Výsledky experimentů budou rovněž presentovány na Studentské vědecké konferenci LF MU v r. 2006. Dále budou presentovány ve formě posterů na celostátních konferencích a bude připraven rukopis publikace.