CE-LIF of Green Fluorescent Fusion Proteins for Investigation of Phosphorylation

• Název česky: Výzkum fosforylace GFP fúzních proteinů pomocí techniky CE-LIF
• Autoři: MICHALCOVÁ Lenka; DOPITOVÁ Radka; HEJÁTKO Jan; RYVOLOVÁ Markéta; VÁLKOVÁ Martina; PREISLER Jan
• Rok publikování: 2011
• Druh: Konferenční abstrakty
• Fakulta / Pracoviště MU: Středoevropský technologický institut

Přiložené soubory

• Michalcova_CE-CE_2011.pdf

• Popis: Ke studiu protein AHP5 fúzovaného s GFP byla použita metoda CE-LIF s budícím zdrojem laserovou diodou 405 nm. Fúzní protein AHP5-GFP byl exprimován v E.Coli a byl použit k optimalizaci metody, prototože přirozený výskyt tohoto protein je v rostlinách ve velmi nízkých koncetracích. AHP5-GFP je nestabilní a dochází k uvolňování GFP, tato skutečnost není ovlivněna teplotou skladováním (-20 a -80 C) ani přídavkem inhibitorů (EDTA, PMFS). Výsledky byly potvrzeny pomocí western blottingu. Fosforylace vzorku AHP5-GFP in vitro je nadále zkoumána. Pro lepší interpretaci elektroforegramů byl vzorek podroben gelové filtraci, kde byly získány hmotnostní frakce Ty byly zkoumány metodou CE-LIF a western blottingem

Související projekty

• Molekulární podstata buněčných a tkáňových regulací
• Multidetekční platforma pro mikrokolonové separace proteinů a peptidů
• CEITEC - středoevropský technologický institut