Informace o publikaci
Odpověď kvasinkových buněk na teplotní šok: vliv osmotického, radiačního a mírného teplotního šoku
| Autoři | |
|---|---|
| Rok publikování | 2000 |
| Druh | Článek ve sborníku |
| Konference | Tomáškovy dny 2000 |
| Fakulta / Pracoviště MU | |
| Citace | |
| Obor | Mikrobiologie, virologie |
| Popis | Na modelu kvasinek Saccharomyces cerevisiae CCY 21-4-59 byly studovány účinky teplotního, osmotického a radiačního stresu na Životaschopnost buněk vystavených letálnímu teplotnímu šoku. Termorezistence nebo termosenzitivita byla zjišťována odčítáním počtu přežívajících buněk (CFU) při 25C. Bylo zjištěno, že přenos buněk z 25C do 46C již během 10 minut vede u většiny buněk ke ztrátě životaschopnosti. Tato teplota byla označována jako letální teplotní šok. Naproti tomu zvýšení inkubační teploty z 25C na 37C nebo 41C (mírný teplotní šok), navodí toleranci buněk k letálnímu teplotnímu šoku 46C (30 min). Technikou Western blotting + ECL bylo prokázáno, že se po mírném teplotním šoku v buňkách zvyšuje hladina stresového proteinu HSP 104, zatímco v lyzátu buněk kontrolních (25C), byly detekovány pouze jeho stopy. Syntéza HSP je zřejmě adaptivní, neboť mírný teplotní šok v přítomnosti cykloheximidu (20 mikro g/ml) nenavozuje žádnou termorezistenci. Zvýšené množství HSP 104 bylo detekováno také metodou nepřímé imunofluorescence v cytoplasmě buněk po mírném teplotním šoku. Zjistili jsme, že resistenci buněk na teplotní šok 46C navodí také osmotický šok (1M KCl) a šok radiační (krátké ozáření UV). Stresové proteiny se tvoří zřejmě pomaleji neboť termorezistence se objeví v buňkách až po 3 hodinách po aplikaci šoku. V kontrolních buňkách vyvolá letální teplotní šok 46C rychlou degradaci jaderných a cytoplasmatických mikrotubulů a jsou zachovány pouze bodově fluoreskující SPB. Vystavení buněk mírnému teplotnímu šoku nevedlo k degradaci mikrotubulů, stejně jako následný teplotní šok 46C. Obdobně se chovají i mikrotubuly při chladovém šoku: zatímco v buňkách kontrolních se při ochlazení 0 C mikrotubuly rozpadnou, v buňkách vystavených mírnému šoku zůstanou po ochlazení mikrotubuly stabilizovány. Oba šoky osmotický i radiační vyvolávají rychlou degradaci mikrotubulů. Mikrotubuly se obnovují po 2 až 3 hodinové inkubaci a jsou stabilní i ve 46C. Aktinový struktury (vlákna a tečky) jsou na teplotní šok velmi citlivý: pouhý přenos buněk do 37 a 41C vede k rozpadu aktinových vláken a dislokaci aktinových teček z rostoucích pupenů. Stresové proteiny, které se vytváří při mírném teplotním šoku, včetně Hsp104, se tedy evidentně podílejí na udržování buněčné integrity během teplotního šoku. |
| Související projekty: |